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                            色谱保留时间漂移的故障排除
                            发布时间:2010-07-12   点击次数:2463次
                             

                            经营:气体发生器,色谱仪维修,气相色谱仪,液相色谱仪,色谱柱

                            保留时间不重现有两种不同的情况:既保留时间漂移和保留时间波动。前者是指保留时间仅沿单方向发生变化,而后者指保留时间无固定规律的波动。将此两种情况区分开来对找到问题的原因往往很有帮助。如,保留时间的漂移往往由柱老化引起?#27426;?#26609;老化不可能引起保留时间的无规律波动。事实上,保留时间漂移的多半原因是不同机理的色谱柱老化,如固定相流失(例如通过水解),色谱柱污染(由样品或流动相所致)等。保留时间漂移的?#38050;謟ui常见的原因如下: 
                              一色谱柱平衡 
                              如果我们观察到保留时间漂移,首先应考虑色谱柱是否已用流动相完全平衡。通常平衡需要10-20个柱体积的流动相,但如果在流动相中加入少量添加剂(如离子对试剂)则需要相?#32972;?#30340;时间来平衡色谱柱。 
                              流动相污染?#37096;?#33021;是原因之一。溶于流动相中的少量污染物可能慢慢富集到色谱柱上,从而造成保留时间的漂移。应注意:水是很容易污染的流动相成分。 
                              二固定相稳定性 
                              固定相的稳定性都是有限的,即使在推荐的PH范围内使用,固定相?#19981;?#24930;慢水解。例如,硅胶基质在pH4时水解稳定性zui好。水解速度与流动相类型和配体有关。双官能?#25490;?#20307;和三官能?#25490;?#20307;比单官能?#25490;?#20307;的键合相要稳定;长链键合相比短链键合相稳定;烷基键合相比氰基键合相稳定的多。 
                              经常清洗色谱柱亦会加速色谱柱固定相的水解。其他硅胶基质键合相在水溶液环境中?#37096;?#20197;发生水解,如氨基键合相等。 
                              三色谱柱污染 
                              保留时间漂移的另一个常见原因是色谱柱污染。HPLC色谱柱是非常有效的吸附性过滤器,它可以过滤并吸附流动相携带的任何物质。污染源可以是:流动相本身,流动相容器,连接管、泵、进样器和仪器密封垫,以及样品等。通常通过实验可判断污染的来源。 
                              样品中如果存在色谱柱上保留很强的组分,就可能是使保留时间漂移的潜在根源。这些根源通常是样品基质。如?#21495;?#33647;中的赋形剂,生化样品(如血清)中的蛋白及类脂类化合物,食品样品中的淀粉,环境水样中的腐殖酸等。通常样品中的强保留组分具有?#32454;?#30340;分子量,在此情况下,保留时间漂移的同时或其后会有反压的增加。可以通过使用固相提取(SPE)等样品前处理方法来去除样品基质的影响。 
                              避免色谱柱污染zui简单的方法是防患于未然。相比之下,找到问题的所在并设计有效的清洗步骤以去除污染物要困难的多。通常使用在给定色谱条件下的强溶剂,但并非所有污染物都可以在流动相中溶解。如THF可去除反相色谱柱中的许多污染物,但蛋白在THF中就不能溶解。DMSO常常用于去除反相色谱柱中的蛋白。 
                              使用保护柱是个非常有效的方法。反冲色谱柱仅是不得已时采用的办法。 
                              四流动相组成 
                              流动相组成的缓慢变化也是保留时间漂移的常见原因。如流动相中易挥发组分的挥发及循环使用流动相等。 
                              五疏水坍塌 
                              当小孔径、端基封口良好的反相填料色谱柱使用接近100%的水为流动相?#20445;?#26377;时会发生分离突然丧失?#27688;?#20998;析物质保留明显降低或完全不保留的现象,这就是疏水坍塌。此现象是由流动相不浸润固定相表面而致。挽救的办法实现用含大量有机组分的流动相浸润固定相,再用高水含量的流动。

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